ELISA完勝訣竅

       在70年代末期也有人采取否定的態度，全面肯定或全盤否定，這些都是不正確的，對一種新方法的建立和深入研究，要采取一分為二的方法加于評價，既要看到方法的優點，也要重視存在的問題，便于進一步研究加以克服。

1)ELISA試劑盒實驗洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
2)用于檢測的樣品應保持新鮮。
3)用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。
4)每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。
5)要確保微量加樣器的準確性，可以使用蒸餾水和電子天平進行確定(由于蒸餾水不含雜質，溫度環境為20%左右時，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣器都應該將其zui高量程和zui低量程進行確定。
6)在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標準品溶液。
7)吸取液體時速度不易太快，以免產生氣泡，吸取的量不夠準確。
8).將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孑L壁接觸，液滴會自然流下去。吸入液體時的的方法是吸兩檔打一檔，防止由于槍頭的毛細作用使得部分液體不能流出而造成的誤差。
9)吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。
10)實驗前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出，使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同，酶標板只要取出所需量。
11)由于底物顯色劑對光及其敏感，因此要避光保存。
12)手工洗板時每次加入洗滌液后。應靜置15～30s，不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。
13)檢測吸光度前應將酶標儀打開，將其預熱30min以上。
14)底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性，應盡量避免接觸皮膚。
15)孵育的時間應該嚴格按照試劑盒說明書上的時間為準。
16)對樣本的結果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。
17沒有去離子水或雙蒸水時，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水。
18)加樣后及時放人孵箱，標本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。
19)顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。
20)合理安排檢測量，以免反應板過多造成洗板等待時間長。
21)加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
22)液體全部加入酶標孔后，將酶標板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應。
23)洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
24)吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
25)要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數據的準確性，又能反映出試劑盒的精密度。
26)為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。
27)未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標記抗人IgG工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標記抗人IgG工作液。
28)作時必須戴手套，穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度。
29)試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。
30)ELISA試劑盒不同批號試劑組分不得混用。
31)剩余樣品及廢棄物應經121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
32) 樣品稀釋液應用加液器加注，并經常校對其準確性。